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HPLC法测定银杏叶缓释微丸胶囊中槲皮素的含量 摘要】目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定银杏叶缓释微丸胶囊中槲皮素的含量。方法:采用C18为色谱柱，以甲醇－0.4%磷酸溶液（45：55）为流动相，检测波长为360nm，流速为1mL/min，柱温为30℃，进样量是10μl。结果: 槲皮素在0.1505～0.9030μg（r＝0.9999）浓度范围内有良好的线性关系，平均回收率为99.86％，RSD=0.4％。结论: HPLC法简便、准确、专属性强，可用于该制剂的质量控制。 【关键词】银杏叶缓释微丸胶囊 槲皮素 高效液相色谱法 含量测定 【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）02-0277-02 银杏叶为银杏科植物银杏树的干燥叶，从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物，主要包括黄酮（双黄酮6种，黄酮苷元7种，黄酮苷17种，桂皮酰衍生物5种）、萜类（银杏内酯A，B，C，J及白果内酯）、烷基酚和烷基酚酸类化合物[1]。性味甘苦涩平，功效为益心敛肺、化湿止泻、主治胸闷心痛、心悸怔忡、痰喘咳嗽、泻痢、白带。银杏叶提取物在临床上主要应用于治疗冠心病、心绞痛、高血压、高血脂症及脑出血痉挛等症，防治中风、心肌梗塞、老年脑血管病、痴呆、大脑脑外伤后遗症、大脑紊乱等[2]。目前开发的银杏叶制剂有片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、口服液、滴剂、软膏、气雾剂、霜剂等多种剂型，也有银杏叶缓释片和缓释胶囊。国内生产的银杏叶制剂多为普通片剂和胶囊等，存在服用次数多、生物利用度低等问题，因此有必要进一步研制开发缓释制剂，满足预防和治疗心脑血管疾病的用药需要。本项目制备了银杏叶缓释微丸，为更好地控制本品质量，本文采用HPLC法测定槲皮素的含量，报道如下。 1 仪器与试药 Waters2695－2996型高效液相色谱仪（美国Waters公司）。 槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：100081-200406）；银杏叶缓释微丸胶囊（自制，规格：含总黄酮醇苷2mg/g，批号：100503）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国迪马公司）；磷酸等其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇－0.4%的磷酸溶液=45：55；流速：1 ml/min；检测波长：360nm；柱温：30℃；进样量：10μl。在此条件下，供试品中槲皮素峰能达到基线分离，理论板数按槲皮素峰计应不低于2500，色谱图见图1、图2、图3。 图3 空白样品高效液相色谱图 2.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品适量置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，再精密量取20ml对照品溶液置200ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度得到槲皮素的浓度分别是30.1μg/ml的对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取银杏叶缓释微丸胶囊10粒，研细，精密称取适量（约相当于银杏叶提取物80mg），置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。 2.4 空白供试液的制备 取处方比例辅料，按银杏叶缓释微丸胶囊制备工艺制得空白胶囊，再按“2.3”项下制备方法制得空白供试品溶液。 2.5 辅料干扰试验 取上述溶液，照“2.1”项下色谱条件，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应保留时间位置上，有三个相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明此法专属性强。 2.6 线性关系考察 精密吸取槲皮素对照品溶液20μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样量（X）为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：槲皮素：y=-15701.9+493445.2x(r=0.9999)，线性范围是：0.1505～0.9030μg； 2.7 重复性试验 取同一批供试品（批号100501）6份，按“2.3”项下的方法制备6份供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件测定。结果槲皮素的峰面积的RSD分别是＝1.1％，表明此法重复性好。 2.8 稳定性试验 取供试品溶液20μl,分别在0、1、2、4、8h进样测定，槲皮素的峰面积的RSD是＝0.8％，表明供试品溶液在8h内测定基本稳定。 2.9 进样精密度试验 取槲皮素对照品溶液连续进样6次，依法测定槲皮素的峰面积，结果槲皮素的峰面积的RSD分别是＝0.7％，表明此法的进样精密度良好。 2.10 加样回收试验 精密称定银杏叶缓释微丸胶囊（批号：100503，含槲皮素0.75mg/g、）粉末适量（相当于银杏叶提取物40mg），分别置20ml量瓶中。再精密量取槲皮素对照品溶液5ml加至上述20ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按“2.1”项下色谱条件，测定槲皮素的峰面积，计算其测得量，结果槲皮素的平均回收率是99.86%，RSD分别是＝0.4％。 表1 槲皮素回收率试验结果 2.11 样品测定 取银杏叶缓释微丸胶囊，研细，精密称取适量（约相当于银杏叶提取物80mg），置20ml棕色容量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解并定容至刻度，摇匀，滤过，按“2.1”项下色谱条件测定槲皮素的峰面积，计算银杏叶缓释微丸胶囊中槲皮素的含量，结果表明银杏叶缓释微丸胶囊中总黄酮醇苷的平均含量是标示量的99.5%，RSD是0.7%。 3 讨论 本文参考中国药典2005年版的银杏叶的质量标准[3]，并且针对本品的制备工艺及其他辅料各种因素及特性，对含量测定部分稍做改动，以保证检验方法的准确性。本缓释微丸胶囊中含有的辅料较为特殊，经实验证明，直接按药典方法的流动相系统会使色谱峰拖尾，适当调整流动相比例可获得较好峰型与分离度。本文建立的银杏叶缓释微丸胶囊的含量测定方法，经方法学验证结果满意。此方法简便准确、专属性强、精密度好、回收率高，为考察银杏叶缓释微丸胶囊的含量以及稳定性实验提供可靠的方法。 参考文献 [1] 何正显，信玉琼.银杏叶的化学成分及抗自由基作用探讨[J].山西中医，2003，19（1）：46～47. [2] 洪梅，梁红，潘伟明.银杏叶黄酮类化合物生物效应研究概况[J].农业与技术，2003，2（1）：33～35. [3] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：220～221. 本文来源：https://www.dywdw.cn/eabf12e6824d2b160b4e767f5acfa1c7ab008200.html
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2023-05-30
