【#第一文档网# 导语】以下是®第一文档网的小编为您整理的《琼脂糖凝胶电泳配方与步骤(精)》，欢迎阅读！
� RNA 琼脂糖凝胶电泳: 配制: 1. 0.5M EDTA(pH=8.0 : 100ml :称取 18.61g Na 2EDTA ·2H 2O (分子量 372.24 ,加 80ml ddH 2O 剧烈搅拌, 用 NaOH 调节 PH 值至 8.0(约需 2g NaOH . 高压灭菌,室温保存。 2. 50×TAEloading buffer:(Tris acetate-EDTA buffer 电泳缓冲液 组分:2MTris-乙酸;100mM EDTA(pH=8.0 500mL:称 121.1g Trisbase(分子量 121.14 ,加 800ml ddH 2O 溶解,加 57.1ml 乙酸和 50ml 0.5M EDTA 溶液(pH=8.0 ,搅拌, ddH 2O 定容至 500mL . 室温保存。 3. 1×TAEloading buffer: 取 20ml 50×TAE, ddH 2O 定容至 1L. 室温保存。 4. 100×Sybergreen : 500ul :取 495ul 1×TAE于 1.5ml 离心管,加入 5ul Sybergreen 原液混匀,4℃锡纸 避光保存。 注意:Sybergreen 原液需稀释 10000倍; 6×DNAloading buffer 上样缓冲液需稀释六倍,最终稀释倍数应不小于 1×。 步骤: 1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml ,我们用 30ml: 称 0.3g 琼脂糖置于 100ml 锥形瓶中,加入 30ml 1×TAE ,瓶口倒扣小烧杯。 微波炉加热煮沸 3次,至琼脂糖全部融化,摇匀,即成 1.0%琼脂糖凝胶液。 2. 胶板制备 : 取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽 洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带 将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并放好梳子 . 将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢 展开 , 直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳 子 , 取下胶带 , 将凝胶及内槽放入电泳槽中 . 添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 3. 加样 : 样品制备:(10ul 体系 /样品槽于 0.25ml 离心管中 样品 RNA (最后加 :2ul /3ul/5ul 6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul 100×Sybergreen :0.1ul DEPC 水:至 10ul (注意 :加样前要先记下加样的顺序 . 分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完 一个样品 , 应更换一个枪头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面 . 4. 电泳 : 加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V , 样品由负极 (黑色 向正极 (红色 方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝移动到距离胶板下沿 约 1cm 处时 , 停止电泳 . 5. 电泳完毕后 , 取出凝胶 , 利用科 212凝胶成像系统 , 在紫外灯(trans UV 下观察拍照 保存 .DNA 存在则显示出红色荧光条带 . RNA 完美提出应该是三条带:28, 18, 5.8。 28和 18比较亮 , 而且 28是 18亮度的 2倍 ,5.8基本很模糊,可有可无 本文来源：https://www.dywdw.cn/cb7605642d3f5727a5e9856a561252d380eb2039.html
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2022-04-07
