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RP-HPLC 摘要】目的 采用RP-HPLC法测定不同产地麦芽中麦黄酮的含量。方法 色谱柱: Zorbax C18(2.1×100 mm，3 μm)，流动相为甲醇-0.1%冰醋酸，检测波长350 nm，进样量 20 μL，柱温为 30 ℃，流速为 0.2 mL•min-1 分析时间为 10 min。结果 麦黄酮线性范围为0.0032～0.1002 mg•mL-1 (r=0.9998)；平均回收率为100.68％ (RSD=2.02%)；安徽产地麦芽中麦黄酮含量最高，广东最低。结论 不同产地麦芽中麦黄酮含量差异较大。 【关键词】麦芽 麦黄酮 高效液相色谱法 含量测定 RP-HPLC determination of tricin in Malts from different regions Fen Xiajiang1 , Ying Dali1, Zhu Maomao2 (1..The second people’s hospital of Lianyungang, Lianyungang 222023, 2. Grain & oil quality test center of Rudong County Grain Bureau, Jiangsu,Rudong, 226400) 【Abstract】objective: To compare the content difference of tricin in malts from different regions by RP-HPLC. method:Zorbax C18（2.1×100 mm, 3 μm）was utilized for determination. The mobile phase was methanol and 0.1% glacial acetic acid（45: 55）, the detection wavelength was 350 nm, the injection volume was 20 μL with a flow-rate of 0.2 mL•min-1. The column temperature was 30 ℃. Analysis time was 10 min. results: The calibration curves of linear range of tricin was 0.0032～0.1002 mg•mL-1 (r=0.9998); the average recoveries was 100.68％ (RSD=2.02%). The content of tricin in malt from Anhui was highest and Guangdong’s was lowest. conclusion: There is a difference on tricin content in malts from different regions. 【Key words】Malt Tricin RP-HPLC Content determination 麦芽为大麦Hordeum vulgare L．的成熟果实经发芽干燥而得。在临床上生麦芽常用于健脾和胃、通乳[1]。麦芽主要含有α--淀粉酶，β-淀粉酶，催化酶，过氧化异构酶，大麦芽碱大麦芽胍碱A、B，腺嘌呤，胆碱，蛋白质，氨基酸，维生素D、D、E，细胞色素C，白栝楼碱等。麦黄酮为麦芽中主要的黄酮类成分，研究表明麦黄酮具有改善小鼠的学习记忆[1]，抗氧化[2]，保护糖尿病动物的神经功能[3]，保护肾缺血[4] 等药理活性。市场上流通的麦芽的药效存在着差异，因此，本研究采用RP-HPLC 法比较市场上流通的不同产地麦芽的麦黄酮含量的差异，为比较麦芽的质量差异提供实验依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 Agilent 1200型高效液相色谱仪，DAD检测器，四元泵，自动进样器，在线脱气系统。麦黄酮对照品购自上海康九化工有限责任公司（纯度 ≥ 98%）。不同批次生麦芽由连云港市第二人民医院药库提供。甲醇冰醋酸为色谱醇(TEDIA); 水为乐百氏纯净水; 其余试剂为分析纯。 1.2 方法与结果 1.2.1 色谱条件 色谱柱: Zorbax C18(2.1×100 mm, 3 μm)，流动相为甲醇-0.1%冰醋酸=45:55，检测波长350 nm，进样量20μL，柱温为30℃。分析时间为10min。色谱图见图1。 1.2.2 溶液的配制 精密称取麦黄酮对照品适量，加10 mL甲醇分别配成浓度为0.1002mg•mL-1的麦黄酮溶液。取不同产地生麦芽，精密称取1.0g，用20mL甲醇超声提取 (2次，2 h/次)，滤过，合并滤液，60℃ 旋蒸至一定体积，加甲醇定容至10mL，即得供试品溶液。过0.45μm 滤膜，按分析条件进样分析。 图1 生麦芽(A)、麦黄酮对照品(B)和阴性空白(C)HPLC图 Fig.1 The HPLC fingerprints of malt, tricin and blank control 1.2.3 线性关系考察 取配制好的对照品溶液，麦黄酮依次用甲醇稀释成0.1002、0.0501、0.0250、0.0125、0.0063、0.0032 mg•mL-1，按色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归处理。麦黄酮的回归方程为Y=94667X+101.75，线性范围为0.0032～0.1002 mg•mL-1 (r=0.9998)。 1.2.4 精密度试验 取同一样品溶液，连续进样6次，每次20 μL，测定峰面积，计算麦黄酮峰面积的RSD值分别为2.33%。结果表明仪器精密度良好。 1.2.5重复性试验 精密称定同一产地生麦芽样品6份，按供试品溶液制备方法制备，测定麦黄酮峰面积，计算峰面积的RSD值分别为2.71%，表明此方法重复性良好。 1.2.6 稳定性试验 取同一样品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，24 h依法测定，考察其稳定性。测定峰面积，麦黄酮平均峰面积的RSD值分别为2.15%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定。 1.2.7 加样回收率试验 称取已知麦黄酮含量的生麦芽9份，每份1.0g，分别加入样品中麦黄酮（0.0032 mg•mL-1）1.6 mL、1.4 mL、1.2 mL(n=9)，制备供试品溶液，得供试品溶液。按上述色谱条件进样分析，结果见表1。 表1 麦黄酮的加样回收率结果 1.3 含量测定 取不同产地麦芽，制备样品溶液，测定麦黄酮的含量。结果见表2。从表中可以看出，不同产地麦芽中麦黄酮含量存在着显著的差异。其含量次序依次为：安徽＞浙江＞四川＞江苏＞河北＞湖北＞湖南＞江西＞广西＞河南＞广东，结果表明，虽同为市场上所用的药材，但是其麦黄酮含量存在着差异，这可能是其临床上药效差异的原因之一。 表2 不同产地样品中麦黄酮的含量 2 讨论 麦黄酮是中药材麦芽中的重要活性成分，目前对其测定主要是HPLC方法[5,6]。在以往的研究中，未见对其不同产地的麦芽进行HPLC成分比较。因此，在本研究中，从市场上采取了11个产地的麦芽样本，建立HPLC分析麦黄酮方法，比较之间麦黄酮含量的差异，从而为质量控制提供实验依据。 本研究中，流动相组成的选择分别考察：乙腈-水；甲醇-水；乙腈-0.1％磷酸；甲醇-磷酸；甲醇-0.5%冰醋酸；乙腈-0.1%冰醋酸；甲醇-0.1%冰醋酸溶液梯度洗脱。通过比较发现甲醇-0.1%冰醋酸流动相使目标峰与其他峰有效分离，且分离度较好，无其他峰干扰，故选择甲醇-0.1%冰醋酸为流动相。分别考察了215nm，252nm，280nm，330nm，350nm波长下色谱分离情况。从研究结果看，350 nm波长为最佳检测波长。本研究建立的分析方法，能为生麦芽的质量控制提供参考依据。 不同产地麦芽中麦黄酮含量差异的主要原因包括：①不同的生长条件，包括土壤，水质，光照，天气等因素；②采制工艺，包括采收时间及原药材的预处理等因素；③药材的存储条件，包括湿度、温度、时间等。这些因素都会对生麦芽中麦黄酮含量构成影响。因此，不同产地的生麦芽中麦黄酮的含量存在着较大差异。 参 考 文 献 [1] 凌俊红, 王楠, 任玉珍, 等. HPLC法测定大麦芽中麦黄酮 [J]. 中草药, 2005,36(11): 1632-1634. [2] 许钢. 苦荞麦黄酮提取最佳条件及抗氧化研究[J]. 中国食品学报,2008,8(3):78-83. [3] 陶胜宇,徐峰,闫泉香.苦荞麦黄酮对糖尿病大鼠神经功能的影响[J]. 实用药物与临床,2006,9(4):219-221. [4] 李玉田,徐峰,闰泉香.苦荞麦黄酮对家犬肾缺血的影响[J]. 中药材,2006, 29(2):169-172. [5] 周惠燕, 李士敏. 竹叶中麦黄酮的分离鉴定及含量测定[J].中药材,2006,29(12):1301-1302. [6] 赵善仓, 赵领军, 谷小红, 等. 超高效液相色谱串联质谱法测定小麦籽粒中麦黄酮[J]. 分析化学, 2009,37(6):873-876. 本文来源：https://www.dywdw.cn/c7a7d443f8b069dc5022aaea998fcc22bdd143d3.html
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2023-04-19
